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天信和Industrack — Vero無血清細胞培養基技術應用交流會
來源: | 作者:天信和生物研發中心 | 發布時間: 290天前 | 643 次瀏覽 | 分享到:


      Vero 細胞是世界衛生組織和我國生物制品規程認可的疫苗生產細胞系。隨著對疫苗質量和安全性要求的不斷提高,使用無血清工藝取代血清工藝培養 Vero 細胞生產病毒疫苗已成為發展趨勢。天信和(蘇州)生物科技有限公司于201971日至5日舉辦了Industrack技術培訓——Vero細胞培養基技術應用交流會。


       本次Vero細胞無血清培養基技術應用交流會邀請了大連雅立峰、廣州諾誠、寧波榮安、吉林邁豐、長春卓誼、成都柏奧特克、北京生物制品研究所、江蘇金迪克、青島蔚藍等9家人用/獸用疫苗單位的老師們參加。 培訓交流過程從Vero細胞無血清消化、傳代等關鍵點控制,到細胞擴增至14L DISK生物反應器培養,進行技術應用實操和交流,期間成都柏奧特克黃林老師分享了使用天信和Vero細胞無血清培養基進行人用狂犬疫苗生產方面的心得體會。












 

Vero細胞方瓶、細胞工廠貼壁培養傳代實驗

筆記關鍵詞:使用經625無血清培養基(天信和Vero細胞無血清培養基)馴化完成的Vero細胞,在方瓶和細胞工廠中進行連續傳代擴增,可以保持良好的生長速率和生長狀態,培養3天,細胞可增殖45倍左右。

 

1625培養基培養Vero細胞72h

從圖1可見,Vero細胞在方瓶中無血清培養72h后,細胞輪廓清晰,立體感強。

                                                                                                          1. Vero無血清細胞培養3天生長情況(方瓶)
                                                                                           


2. Vero無血清細胞培養3天生長情況(細胞工廠)

 

從表1、表2可見, 在無血清的連續傳代過程中,Vero細胞在625 無血清培養基中保持有良好的生長狀態和生長速率。增殖比例基本在4-5倍左右。


 

14L固定床生物反應器無血清培養Vero細胞

 

筆記關鍵詞:使用625無血清培養基和天信和14L DISK生物反應器進行Vero細胞無血清大規模培養,為后期Vero無血清生物反應器生產狂犬疫苗工藝打下基礎。14L固定床反應器裝載70g片狀載體,培養結束后采用結晶紫染色法進行細胞核計數。

2.1 固定床生物反應器培養Vero細胞時細胞生長情況

       使用細胞工廠進行種子細胞的擴增,消化3 10層細胞工廠接種生物反應器,接種密度為9×104cells/ cm2,由于技術交流時間有限,在培養90h后,細胞密度達到46×104cells/ cm2,即細胞的擴增倍數5倍以上。初步表明625無血清培養基和天信和14L DISK生物反應器滿足Vero細胞無血清大規模培養要求。

       由于在14L DISK生物反應器中無法直接取樣觀察細胞狀態,所以細胞培養時對葡萄糖代謝、溶氧下降速率等是細胞生長主要指標的監控顯得尤為重要。可用這幾項指標反應細胞的生長狀況,根據圖2可知,隨著培養時間的增加,培養液中葡糖糖含量不斷減少、溶氧下降速率有明顯提高,說明細胞數量正不斷增長。在葡萄糖消耗量達一定量時,開啟灌流,灌流速度需根據細胞耗糖情況進行適時調整。


214L DISK反應器培養數據

 

2.2 固定床生物反應器無血清培養Vero細胞的生長情況

      用細胞工廠種子細胞接種生物反應器,接種密度為8.9×104cells/ cm2,培養4天(91h),細胞密度達到45.95×104cells/ cm2即細胞的擴增倍數約5.15倍,增殖倍數高(表3)。因此用天信和DISK生物反應器可以較好的滿足Vero細胞的無血清培養。

 

3DISK生物反應器培養Vero細胞數據


 

結  語  :

       天信和Industrack是一個我們與客戶之間就細胞培養基研發制造應用、生物反應器設計應用及工藝過程技術等技術交流平臺。
我們希望通過此平臺,加強行業技術經驗的交流及應用,為生物制藥行業貢獻一份力量。

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